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Profili di melting

L’HRM è una moderna tecnica in grado di caratterizzare gli amplificati di PCR e di analizzare variazioni genetiche come le mutazioni, gli SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) e le metilazioni presenti nei DNA a doppio filamento (double stranded DNA – dsDNA). Usando l’HRM, lo strumento può caratterizzare i campioni basandosi sulla lunghezza di sequenza, il contenuto di GC e la complementarità della sequenza stessa del DNA.

La tecnica si fonda sull’utilizzo di coloranti fluorescenti che si legano esclusivamente al dsDNA e che perdono la propria fluorescenza quando si ha denaturazione del DNA con le alte temperature. In base alle differenti forme che assumono le curve di denaturazione (melting curves) del dsDNA si possono confrontare le sequenze di due campioni di DNA con molta accuratezza, semplicità ed in maniera rapida ed economica. I risultati sono paragonabili ai più lunghi e più costosi metodi convenzionali come SSCP, DHPLC, RFLP, inoltre l’analisi HRM sembra possedere una specificità e sensibilità maggiori.

Alessandro Lombardo per Siculidivini